烏鬼井建於明永曆年間，位於當時府治的鎮北坊(今
台南市北區自強街146巷10號)。以菻荼(林投)砌築的，又稱「菻荼井」。列為三級古蹟。
原為疊砌而成井洞與護欄，以石灰粉飾，戰後以泥加以整修，安全因素加上蓋板。由荷蘭人命黑奴所開鑿的，當時烏鬼井「水源豐盛，又因鄰近府城南北通衢的大街，往來船隻與附近居民飲用，十分熱鬧。」日據時期，烏鬼井被填塞湮滅，使用行為至此中斷。
民國44年，經由
台南市文獻委員會挖掘，加以修復，昔日居民常取井水食用、做豆腐，後因為使用自來水，逐漸不再取用烏鬼井水，至今井水已幾乎完全無人使用。